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犬布魯氏桿菌PCR檢測試劑盒使用方法

瀏覽次數:790發(fā)布日期:2023-03-08

犬布魯氏桿菌PCR檢測試劑盒使用方法:


一、稀釋PCR陽性對照(以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例)


1. 注意:由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。


2. 標記6個離心管,分別為7,6,5,4,3,2。


3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。


4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩1分鐘,得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。


5. 換槍頭,在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。


6. 換槍頭,在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中,充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。


7. 重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。


二、樣品DNA的制備


8. 如果有N個樣品,必須設置N+2個提取,多出的一個是PC(樣品制備陽性對照),一個是NC(樣品制備陰性對照)??梢杂?0μL上步制備的PCR陽性對照的第4號(濃度為1×10E4 拷貝/μL,10μL相當于1萬拷貝)或第5號(濃度為1×10E5 拷貝/μL,10μL相當于10萬拷貝)再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品,則PC和NC的體積也必須是200μL。


9. 用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場上大多數病毒DNA提取試劑盒兼容。


三、設置qPCR反應(20 μL體系,在樣品制備室進行)


10. 如果只做1次重復,則標記N+9個PCR管,其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,1個用于PCR陰性對照,6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復,則反應設置數量相應增加2或3倍。


11. 在標記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加)

小鼠核因子-κB亞基p65親和肽(NF-κB p65)ELISA KitMouse nuclear factor-κB p65,NF-κB p65 ELISA Kit

小鼠核因子κB(NF-κB)ELISA KitMouse Nuclear factor-kappa B,NF-κB ELISA Kit

小鼠核因子E2相關因子2(Nrf2)ELISA KitMouse Nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2 ELISA Kit

小鼠含免疫球蛋白樣環(huán)和上皮生長因子樣域酪氨酸激酶2(Tie-2)ELISA KitMouse tyrosine kinase with immunoglobulin-like and EGF-like domains 2,Tie-2 ELISA kit

小鼠含免疫球蛋白樣環(huán)和上皮生長因子樣域酪氨酸激酶1(Tie-1)ELISA KitMouse tyrosine kinase with immunoglobulin-like and EGF-like domains 1,Tie-1 ELISA kit

小鼠過氧化脂質/乳過氧化物酶(LPO)ELISA KitMouse Lipid Peroxlde,LPO ELISA Kit

小鼠過氧化物酶體增殖因子活化受體β(PPAR-β)ELISA KitMouse Peroxisome Proliferator-activated Receptor β,PPAR-β ELISA Kit

小鼠過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPAR-α)ELISA KitMouse peroxisome proliferators activator receptors alpha,PPAR-α ELISA Kit

小鼠過氧化氫酶(CAT)ELISA KitMouse Catalase,CAT ELISA Kit

小鼠果糖銨(FRA)ELISA KitMouse fructosamin,FRA ELISA kit

小鼠胱天蛋白酶9(Casp-9)ELISA KitMouse Caspase-9,Casp-9 ELISA Kit

小鼠胱天蛋白酶7(Casp-7)ELISA KitMouse Caspase 7,Casp-7 ELISA Kit

小鼠胱天蛋白酶5(CASP-5)ELISA KitMouse Caspase-5,CASP5 ELISA kit

小鼠胱天蛋白酶3(Casp-3)ELISA KitMouse Caspase 3,Casp-3 ELISA Kit

小鼠胱天蛋白酶10(CASP-10)ELISA KitMouse Caspase-10,CASP10 ELISA kit

小鼠骨形成蛋白6(BMP-6)ELISA KitMouse Bone morphogenetic protein 6,BMP-6 ELISA Kit


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