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定量PCR檢測試劑盒使用時應(yīng)注意以下方面

瀏覽次數(shù):620發(fā)布日期:2021-11-19
  定量PCR檢測試劑盒的適用范圍廣,包含一系列生物樣品,如血液、動物、植物、真菌、酵母、細(xì)菌和病毒等,簡化實驗步驟,減少大量的核酸純化試劑的消耗,問研究人員節(jié)約大量的時間和科研費(fèi)用。對于商檢、CDS、疾病診斷的用戶,還可以在很大程度上降低污染,包含操作人員的安全。
  定量PCR檢測試劑盒使用時應(yīng)注意以下方面:
  1.保存
  未拆封的試劑盒,請于-20℃保存;拆封之后,應(yīng)在4℃保存。在試劑消耗量較少的實驗室,可以考慮將試劑盒的按照組分單獨(dú)分裝,后保存在-20℃。
  2.配置
  PCR試劑盒內(nèi)所含各組份都是混合物,在靜置情況下會發(fā)生分層現(xiàn)象,因此試劑盒現(xiàn)配現(xiàn)用,震蕩混勻,避免反復(fù)凍融,避免預(yù)混。其中,反復(fù)凍融將大幅縮短試劑盒使用壽命。
  在擴(kuò)增體系的選擇時,盡量選擇標(biāo)準(zhǔn)體系,再根據(jù)檢材情況加入模板,之后切勿忘記以PCR用水補(bǔ)足擴(kuò)增體系。
  3.切勿預(yù)混
  因試劑盒中酶的活性較高,將各組份按照比例混合之后,即使沒有達(dá)到它的適溫度,但也可能發(fā)生與引物結(jié)合,導(dǎo)致實驗結(jié)果出現(xiàn)丟位點(diǎn)或者雜合子純化等情況。
  4.陰陽性參照
  實驗結(jié)果會受提取、擴(kuò)增和電泳等多個環(huán)節(jié)的影響,因此,每次擴(kuò)增實驗都應(yīng)該添加一組陰陽性參照。這樣,當(dāng)結(jié)果異常的時,我們就可以結(jié)合陰陽性參照的表現(xiàn),排查問題出在哪個環(huán)節(jié)。
  5.陽性參照是否通用
  雖然多數(shù)試劑盒的陽性參照都是007,但是案件試劑盒和建庫試劑盒的陽性參照濃度不同,通常來說案件試劑盒的濃度更低,擴(kuò)增時需選用試劑盒相對應(yīng)的陽性參照。
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